CUT&Tag
技术介绍
CUT&Tag（ Cleavage Under Targets and Tagmentation ） 技术是研究蛋白质和DNA相互作用的新兴技术，相较传统的ChIP技术， 具有操作简单，细胞用量少（可少至几十个细胞甚至单细胞），信噪比高等优点。CUT&Tag可对组蛋白修饰和其他目的蛋白的结合位点进行全基因组范围内的揭示， 已成为表观遗传领域重要的研究手段。
技术原理和路线
送样要求
| 样本类型 | 样本量 | 收样步骤 | 运输方式 |
|---|---|---|---|
| 新鲜细胞（无支原体等污染） | 5w-10w细胞/管，每个生物学重复至少两个技术重复。 | （1）收集细胞活性、生长状态良好的细胞； （2）计数并调整细胞浓度； （3）转移建议的细胞量至 1.5 mL离心管，低速离心沉淀细胞后，使用 100-200ul 培养基轻轻重悬； （4）使用封口膜封好离心管，用碎冰保持管周边温度在4℃左右，闪送至公司。 |
4°冰袋/碎冰 |
| 冻存细胞 （无支原体等污染） | 5w-10w细胞/冻存管，每个生物学重复至少两个技术重复。 | 1）收集细胞活性、生长状态良好的细胞； （2）计数调节冻存液中细胞的最终密度为10w-20w个/ml； （3）转移500ul细胞悬浮液至冻存管中； （4）把冻存管放到程序降温盒内， 再把程序降温盒放到-80℃的冰箱，以保护细胞不被损伤； （5） -80℃过夜后，即可使用干冰运输。 （细胞冻存液配方： 70%细胞培养基+20%胎牛血清+10%DMSO） |
干冰 |
| 动物组织 | 约20mg/管(动物)，每个生物学重复至少两个技术重复。 | （1）组织切成长宽高均≤0.5cm 的小块或薄片； （2）将处理好的组织样本混合均匀后保存于1.5ml 离心管，每管20mg 左右（每个样本分装 2 管； （3） 迅速于液氮中速冻，后转移至-80℃冰箱中保存； （4）为确保实验的顺利，建议样品技术重复备份1-2 份，20mg/份，以防部分样品降解重新取材、制备或送样。 |
干冰 |
常见问题
Q1：冻存的组织是否能进行CUT&Tag?
冻存的组织只要保证目的蛋白与DNA没有解离都可以用于下游CUT&Tag实验，冻存的组织尽量液氮速冻且-80保存。
Q2：CUT&Tag测序需要几个生物学重复？
建议做3个及以上。